疯牛病组织病理学方法诊断技术

　　组织病理学方法(histopathology)是疯牛病检测方法中最经典的方法。疯牛病的病理变化主要在中枢神经系统，但肉眼不能辨别，只能通过常规 H.E染色的组织病理切片用生物显微镜观察才能诊断。BSE病牛的病理变化以脑干部灰质的空泡化为特征，且呈现双侧对称。在神经纤维网 (neuropil)中也有一定数量的散在空泡存在，呈海绵状病变。空泡主要集中在脑干的某些神经核团，主要的有迷走神经背侧核、孤束核、三叉神经脊束核、红核、中央灰质和前庭复合体，其中孤束核、三叉神经脊束核和中央灰质出现空泡变化的概率为最高。空泡呈规则的圆形或卵圆形，胞核常被空泡挤在一侧，有时一个神经元里有多个空泡存在，神经纤维网中的空泡则呈海绵状变化。病牛的另一个脑部病理变化是星形胶质细胞增生。

　　本方法耗时较长，约需14天才能出结果。用本方法诊断疯牛病时必须有较高的专业水平和丰富的神经病理学观察经验。在组织切片效果较好时，确诊率可达90%。

　　疯牛病组织病理学检测方法的主要步骤如下。

　　(1)样品准备 病牛宰杀后，要尽快用特制采样勺(农业部动物检疫所国家牛海绵状脑病参考实验室可以提供)通过枕骨大孑L处将牛脑的延髓取出，或者用电锯或砍刀将牛的颅腔打开取出脑干。腐烂的牛脑不能用于组织病理学检查。将取出的脑组织立即投入到新鲜配制的10%福尔马林溶液中固定1周，固定完后在脑闩部、前丘部、小脑后脚部横切一块3～4mm厚的组织块，用新鲜配制的固定液中再固定3天。

　　(2)脱甲醛 将固定好的组织块放人流水中漂洗24h。

　　(3)脱水 依次用75%酒精、85%酒精、95%酒精和100%酒精浸泡处理组织块，使其水分充分脱去。

　　(4)透明 脱完水的组织块用二甲苯浸泡透明。

　　(5)浸蜡与包埋 透明好的组织块立即投入到软蜡和硬蜡中处理，充分浸透石蜡，然后用硬蜡包埋组织块。

　　(6)切片 将包埋好的组织块切成5/lm厚的切片，用贴附有黏片剂的载玻片贴片，并放人干燥箱中烘烤玻片，使组织切片贴附更紧，实验肘才不容易掉片。

　　(7)H.E染色 在二甲苯、不同浓度的酒精处理切片后，用哈里斯酸性苏木精和伊红

　　处理切片，然后再用不同浓度的酒精和二甲苯处理切片，最后用中性树胶封片。

　　(8)光学显微镜观察 在光学显微镜下(10X10、10X20、10X40)观察切片,被检样品脑干灰质区特别是脑闩部位的孤束核、迷走神经背核、三叉神经脊束核、;红接和动跟神经核等处的神经元核周体或神经纤维网胞浆中出现双侧对称性海绵状空泡病变，且空袍呈现则的圆形或椭圆形，周边整齐，则可判定为BSE阳性。在正常情况下，动眼神经核稿红核处的核周体也可能有少量空泡出现，但不呈双侧对称，应注意区别。

　　若在脑干灰质区未发现双侧对称性海绵状空泡病变，则用免疫组织化学方法做进一步诊断。

（实习编辑：陈俊琦）

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