糖尿病(DM)的血管病变是DM的主要并发症之一，它严重影响了糖尿病病人的预后和生存，病人血管内皮细胞的损伤可能是血管病变的一个重要原因。一氧化氮(NO)是近年来发现的一种具有舒张血管、松驰血管平滑肌和抑制内皮细胞增殖作用的物质。微血管病变是DM肾脏、眼底、神经病变的特征性病变，大血管病变严重影响心、脑、肾等重要器官。NO在DM及其并发症的发生、发展中可能发挥重要作用。我们采用高效液相色谱法测定NO水平，以探讨它们在DM及其血管并发症发生发展中的重要意义。
对象和方法
一、对象
74例DM患者均为我院住院病人，男39例，女35例，年龄(48.6±13.5)岁(14～68岁)，病程(7.05±5.66)年(0.5～22年)。按有无高血压或(和)DM微血管并发症分为以下几组。
A组：DM无任何并发症18例，年龄(48.2±10.2)岁，病程0.5～6年。
B组：DM有高血压(BP≥140/90mmHg)，而无肾脏、眼底微血管病变17例，年龄(47.5±11.3)岁，病程3～11年。
C组：DM无高血压而有肾或(和)眼底微血管病变25例，年龄(48.5±13.2)岁，病程5～15年。
D组：DM有高血压和肾和(或)眼底微血管病变14例，年龄(48.9±12.1)岁，病程9～22年。
肾脏微血管病变包括早期肾病(尿白蛋白排泄率20～200μg/分钟)及临床肾病(尿白蛋白排泄率>200μg/分钟)，眼底微血管病变包括单纯性及增殖性糖尿病视网膜病变。
30例无DM家族史的正常健康家属、本院工作人员作为本研究的对照组，男17例，女13例，年龄(46.2±12.2)岁(22～60岁)，其年龄、性别与病例组无差别。
二、实验方法
1.采血前病人条件：采血及检查前不用或停用血管活性药物一周，三日内不进硝酸盐、亚硝酸盐饮食。检查前一周禁烟酒，检查前三天不做剧烈活动。受试者均于清晨取肘静脉血，分别检测NO及空腹血糖。
2.NO的测定：检测仪器为美国Waters公司生产的高效液相色谱分析仪，参照美国Wasters公司提供的EPA-101饮用水硝酸盐、亚硝酸盐检测法略加修改。本实验是测定硝酸盐和亚硝酸盐浓度，间接显示体内NO的水平。检测时，取全血2ml加肝素20μl抗凝，3000转/分离心后分离血浆200μl，加入200μl乙腈充分震荡后静置10分钟，3000转/分再次离心取上清液200μl加入超滤试管10000转/分，离心10分钟，取滤液20μl上机分析。检测范围硝酸盐200～3200ng/ml，亚硝酸盐100～600ng/ml。
3.甲襞微循环测定：采用徐州光学仪器总厂生产的WX-753型微循环显微镜。检测时间为14点～16点，室温18～20℃，皮温32～33℃，患者须在安静状态下进行检测。一律取坐位，取左手无名指甲襞做检测，并且检测手放置与心脏同一水平。按解放军总医院田牛教授的加权积分法作记录汇总。
4.经颅多普勒检查脑血流：西德生产的TC-200经颅多普勒超声诊断仪，具有2.0MHz、4.0MHz、8.0MHz三个探头，我们选择2.0MHz的探头扫描。14:30～16:00于受试者的两侧颞窗探查大脑中动脉(MCA)、大脑前动脉(ACA)、大脑后动脉(PCA)、颈内动脉(Siph);于两侧枕窗探查椎动脉(VA)、基底动脉(BA)。血流频谱均可自动计算出收缩期及舒张期流速，平均血流速度及血管脉动指数。
5.C肽、胰岛素及尿蛋白均采用放射免疫法测定，由中国原子能科学研究院提供药盒。血糖测定采用葡萄糖-过氧化物酶法。
三、统计学处理
各项指标的测定结果均以±s表示，各组间的均数差异性比较采用t检验或方差分析，NO与血流速度的相关关系采用直线相关回归分析。
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